病毒名称 | 表达基因 | 病毒滴度 | 是否浓缩 |
---|---|---|---|
SpCas9LV | SpCas9 | 1*10^7 TU | 否 |
SpCas9LVC | SpCas9 | 2*10^7 TU | 是 |
操作需在生物安全二级(BSL-2)实验室进行,穿戴防护装备并规范处理废弃物(建议使用1% SDS或70℃加热灭活)。病毒液避免反复冻融,解冻时需置于冰上缓慢溶解,短暂4℃保存不超过24小时。感染细胞时建议优化MOI值(通常为5~50),加入聚凝胺(Polybrene,终浓度4~8 μg/mL)以提高感染效率。
病毒颗粒长期保存需置于-80℃,冻融后立即使用(不能反复冻融),运输时需使用干冰。慢病毒建议在6个月内使用,活性衰减后需重新测定滴度。
慢病毒颗粒由第三代包装系统(psPAX2、pMD2.G)在HEK293T细胞中生产,预分装为非浓缩版(约1*10^7 TU/mL)和浓缩版高滴度病毒液(约1×10⁸ TU/mL),提供Cas9、dCas9VPR和dCas9-KRAB三种类型,Blasticidin抗性。
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