| 组分 | PK201A | PK201B | 保存条件 |
|---|---|---|---|
| Nuclease-free H2O | 5 mL | 5 mL | -20℃ |
| PCR Master Mix (2×) | 5 mL | 5 mL | -20℃ |
| Primer Mix #V1-V6 (10 μM) | 各80 μL×2 | — | -20℃ |
| Primer Mix #V7-V12 (10 μM) | — | 各80 μL×2 | -20℃ |
| Positive Control A (Plasmid) | 10 μL | 10 μL | -20℃ |
| Positive Control B (Genomic DNA) | 100 μL | 100 μL | -20℃ |
1. 样本和Primer Mix需一一对应，不建议使用同一Primer Mix扩增不同样本。PCR反应需达到推荐反应数，以保证测序准确度。
2. 目的条带大小约300 bp，不同骨架载体扩增的条带可能存在一定差异，属正常现象。
3. 若扩增条带较弱请使用200 µLPCR产物进行切胶回收。
4. Illumina测序时，各样本请根据CRISPR文库包含的sgRNA数量计算测序深度，例如1000条sgRNA测0.17G数据量，可覆盖每条sgRNA 500×。
请将试剂盒置于-20℃条件下保存；使用前，各组分需充分融解、震荡混匀和离心。
本试剂盒适用于LentiCRISPRv2为骨架载体的文库sgRNA扩增，可应用于CRISPR文库质粒NGS测序质控，也可对CRISPR筛选得到的细胞/组织样本进行NGS测序建库，利用本试剂盒构建好的NGS测序文库可直接上机。本试剂盒的主要优势包括：（1）采用一步法快速构建sgRNA NGS测序文库，使用高保真、高效率反应体系对sgRNA区段进行扩增，同时将测序接头组装至sgRNA序列两端；（2）无需进行多轮PCR，有效避免PCR过度扩增和产物反复纯化等操作引入的偏差。本试剂盒可大幅简化sgRNA NGS测序文库的构建流程，降低NGS建库成本，同时减少实验误差和损耗，有效保证功能筛选结果的准确可靠。
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