| 组分 | 10 Preps | 保存条件 | — |
|---|---|---|---|
| Enzyme Mix（BsmBI） | 10 μL | -20℃ | — |
| Buffer（10×） | 20 μL | -20℃ | — |
| Positive Control | 10 μL | -20℃ | — |
| GlycoBlue Coprecipitant | 10 μL | -20℃ | — |
| NaCI Solution（5M） | 10 μL | -20℃ | — |
| Tris-EDTA Buffer | 100 μL | -20℃ | — |
| Nuclease-free H₂O | 500 μL | -20℃ | — |
1. 浓度测定： 所有浓度推荐使用Qubit dsDNA HS Assay Kit进行测定。若使用Nanodrop测定浓度，骨架载体需添加至0.1 pmol, 引物池PCR产物需添加至0.2 pmol, 其它组分使用量不变。
2. 文库引物池PCR产物：研美生物可提供sgRNA 引物池合成服务和高质量纯化后的文库引物池PCR产物，详情可咨询销售和技术服务。
3. LB培养基抗生素： 请根据sgRNA骨架载体上的抗性向LB培养基中添加相应的抗生素。
请将试剂盒置于-20℃条件下保存；使用前，各组分需充分融解、震荡混匀和离心。
本试剂盒适用于酶切位点为BsmBI（Esp31）的sgRNA 骨架载体（LentiCRISPRv2、LentiGuide-Puro等），采用一步法快速构建CRISPR文库。本试剂盒的主要优势包括：(1)无需对载体进行酶切和胶回收纯化，只需一步反应即可将扩增后的引物池高效组装至骨架载体，极大简化了CRISPR文库构建流程，缩短建库时间；(2)能有效避免传统方法中因载体酶切不充分 引起空载体污染的问题，或者因载体酶切过度导致反应效率下降的困扰；(3)将固体平板法改为液体培养法，在大幅降低了操作难度的同时，提高了CRISPR 文库质粒提取的质量和产量。本 试剂盒为实验室实现自主CRISPR 文库构建提供可靠而便捷的解决方案。
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